MoloneyMurineLeukemiaVirusReverseTranscriptase(M-MLVRT)是一种RNA依赖的DNA聚合酶。它可以以RNA为模板，在适当的引物引导下，通过碱基互补配对的原则，持续渗入dNTPs、形成磷酸二酯键，并最终合成出cDNA。合成出来的cDNA长度可大于5kb。M-MLV酶的RNaseH活性比另外一种常用的逆转录酶AvianMyeloblastosisVirus(AMV)弱，因此更适合于反转录长链RNA。M-MLV逆转录酶的反应活性小于AMV逆转录酶，因此产生相同量的cDNA需要更多分子的M-MLV逆转录酶。

M-MLVReverseTranscriptase的酶活性定义为在37℃将1nmoldNTPs渗入酸可沉淀的物质所需要的酶量。反应的具体条件为50mMTris-HCl(pH=8.3)、7mMMgCl2、40mMKCl、10mMDTT、0.1mg/mlBSA、0.5mM[3H]dTTP、0.025mMoligo(dT)、0.25mMpoly(A)、0.01%NP-40。经检测，OneShineM-MLV酶活性为200U/ul。