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产品概述
T7 RNA 聚合酶是一种来源于 T7 噬菌体的一种依赖于 DNA 的 RNA 聚合酶,具有高度特异性的 5’→3 ‘端的 RNA 聚合酶活性。T7 RNA 聚合酶对 T7 启动子具有较高的特异性,能够以T7 启动子下游序列为模板合成大量的 RNA。
运输与保存方法:在 0℃ 以下进行运输;于 -25~-15℃ 保存,有效期为 24 个月。
单位定义:在标准反应体系下,于 37℃ 在 1 小时内将 1 nmol 的 ATP 掺入酸性不溶物所需要的酶量定义为一个活性单位(U)。
质量控制
• 核酸内切酶残留检测:40μL 反应体系中 200 U 本酶和 4μg pUC19 DNA 在 37℃ 下反应 16 小时,琼脂糖凝胶电泳 DNA 谱带不发生变化。
• 核酸外切酶残留检测:50μL 反应体系中加入 200 U 本酶和 1μg λ-Hind III digest DNA 在 37℃ 下孵育 16 小时,琼脂糖凝胶电泳 DNA 谱带不发生变化。
• 核酸切口酶残留检测:50μL 反应体系中加入 200 U 本酶和 1μg pBR322 DNA在37℃下孵育16小时,琼脂糖凝胶电泳DNA谱带不发生变化。
• RNase残留检测:50μL 反应体系中加入 200 U 本酶和 1.6μg MS2 RNA 在 37℃ 下孵育 4 小时,琼脂糖凝胶电泳 RNA 谱带不发生变化。
• 热失活:75℃,10 min。
• 反应时间:37℃ 孵育 1-2 h。
• 反应终止:加入 2μL 0.2 M EDTA (pH 8.0 25℃) 或者 75°C 加热 10 min。
• DNA模板去除:可用 DNase I (2 U) 37 ℃ 处理 15 min。
反应抑制剂:金属离子螯合剂、NaCl 和 KCl,该酶对高浓度 NaCl 或 KCl 不耐受,当其浓度超过 150 mM 时,活性受到显著抑制(活性约降低 50%)。
产品概述
T7 RNA 聚合酶是一种来源于 T7 噬菌体的一种依赖于 DNA 的 RNA 聚合酶,具有 DNA 聚合酶活性和较强的 3´→5´核酸外切酶活性。T7 RNA 聚合酶对 T7 启动子具有较高的特异性,能够以 T7 启动子下游序列为模板合成大量的RNA。
运输与保存方法: ≤0℃ 运输;-25~-15℃保存。
单位定义: 在标准反应体系下, 37℃ 1 h 内将 1 nmol 的 ATP 掺入酸性不溶物所需要的酶量定义为一个活性单位(U)。
质量控制
• 核酸内切酶残留检测:50μL 反应体系中加入 50 U 本酶和 1μg λ DNA 在 37℃ 下孵育 16 h,琼脂糖凝胶电泳 DNA 谱带不发生变化。
• 核酸外切酶残留检测:50μL 反应体系中加入 50 U 本酶 1μg λ-Hind III digest DNA 在 37℃ 下孵育 16 h,琼脂糖凝胶电泳 DNA 谱带不发生变化。
• RNase 残留检测:40μL 反应体系中加入 40 U 本酶和 1μg MS2 RNA 在 37℃ 下孵育 2 h,琼脂糖凝胶电泳 RNA 谱带不发生变化。
• DNase 残留检测:40μL反应体系中加入40 U本酶和4μg pUC19 DNA 在 37℃ 下孵育 16 h,琼脂糖凝胶电泳 DNA 谱带不发生变化。
• 热失活:75℃,20 min
反应时间:37℃ 孵育 2 h。
反应终止:加入 2μL 0.2 M EDTA (pH8.0 25℃) 或者 75°C 加热 20 min。DNA 模板去除:可用DNase I (2 U)37℃ 处理 15 min。
反应抑制剂:金属离子螯合剂、NaCl 和 KCl,该酶对高浓度 NaCl 或 KCl 不耐受,当其浓度
超过 150 mM 时,活性受到显著抑制(活性约降低 50%)。
注意事项
• 常规转录反应体系中 NTP 最适终浓度为 10mM,Cap1 共转录加帽体系中 NTP 最适终浓度为 7.5 mM,实际用量应根据 NTP 原始浓度合理配制。
• 转录反应配制应在无 RNase 污染的环境中完成,操作过程建议佩戴手套。使用无核酸酶的水、吸头和反应管进行体系配制。
• 反应体系需要在室温下配制,避免在 4°C 产生沉淀。
• 模板 DNA 线性化不完全,可能降低转录产物产量和长度。
• 反应体系体积可根据实际需求按比例进行放大或缩小。