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乳酸脱氢酶

英文名称:LDH
CAS:9001-60-9
货号: HH1701-01 HH1701-02 HH1701-03 HH1701-04
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中文:乳酸脱氢酶
英文:LDH
CAS:9001-60-9
分子式:C3H5O3
纯度:≥90%
货期:24h
货号:HH1701-01
规格:10ku
中文同义词:乳酸脱氢酶(硫酸铵悬浮液), L-乳酸脱氢酶,乳酸脱氢酶(兔肌),
英文同义词:Lactate Dehydrogenase,

技术指标:

外观:白色无定型冻干粉末;蛋白纯度:≥90%;比活性:≥200 U/mg酶粉;NADH/NADPH 氧化酶:≤0.01%;苹果酸脱氢酶:≤0.005%;谷氨酸脱氢酶:≤0.003%;丙酮酸激酶:≤0.03%

酶学性质

来源: 微生物;分类: EC 1.1.1.28;分子量: 45 kDa(SDS-PAGE);等电点: 4.5;Km值:2.2×10-6 M (丙酮酸);抑制剂:Ag+,Hg2+;最适pH:6.5-7.0;最适温度:45℃;pH稳定性 5.5-10.0 (25℃,16 h);热稳定性 50℃ 以下稳定 (pH 7.0,30 min);稳定性:-25~-15℃ 静置保存 12 个月保持 90% 以上活性;保护剂:BSA。

用途:用于谷草转氨酶,谷丙转氨酶等试剂的研发和大量配制。

酶活定义

单位酶活定义为在下述条件下,每分钟氧化 1μmol NADH 所需的酶量。

试剂准备

试剂I:称取 0.04 g 丙酮酸钠,用 0.1 M,pH7.7 Tris-HCl 缓冲液溶解并定容至 100 mL。

试剂II:称取 2.11 g CAPS,用 80 mL 水溶解,用 NaOH 调节 pH 至 9.7,加入120 mg NADH,用双蒸水定容至 100 mL。

酶稀释液:10 mM,pH 7.0 磷酸钾缓冲液,并加入 BSA 至终浓度 0.1%。

样品:用预冷的酶稀释液将酶稀释至 1-2U/mL。

操作步骤

1.  向1 mL比色皿中加入1 mL试剂I,20μL待测样品,混匀。

2.  将反应混合物在37℃预热5 min。

3.  向反应混合物中加入 0.2 mL 试剂II,混匀,37℃ 反应,并用分光光度计在 340 nm下,记录 1 min 内的吸光度变化(ΔAs)

*用酶稀释液替代酶液,其它步骤相同,所得溶液吸光度为空白吸光度(ΔAb)ΔA=ΔAs-ΔAb

Q:乳酸氧化酶

技术指标

外观:黄色无定型冻干粉末;蛋白纯度: ≥90%; 比活性:≥20 U/mg酶粉; 丙酮酸氧化酶:≤0.001%; 胆碱氧化酶:≤0.001%; 尿酸酶:≤0.001%; 葡萄糖氧化酶:≤0.001%

酶学性质

来源: 微生物; 分类: EC 1.1.3.2; 分子量:  42kDa (SDS-PAGE); 等电点:  pH 4.6; Km值:7.5×10-4 M(L-Lactate); 最适pH:6.0-7.0; 最适温度: 50°C; pH稳定性:pH 6.0-8.5(25°C,16 h); 热稳定性:50℃ 以下稳定(pH 7.0,30 min); 稳定性:-25~-15℃ 静置保存 12 个月保持 90% 以上活性. 用途: 用于乳酸含量的检测

酶活定义

单位酶活定义为在下述条件下,每分钟催化生成 1μmol H2O2  所需的酶量。

试剂准备

试剂I:0.2 M pH 6.5 磷酸钾缓冲液。

试剂II:1kU/mL 过氧化物酶(POD)溶液。

试剂III:50 mM 4-AA 溶液。

试剂IV:0.5 M DL- 乳酸溶液,pH 6.5。

试剂V:50 mM TOOS 溶液。

酶稀释液:10 mM pH 7.0 磷酸钾缓冲液含  10μM FAD。

样品:用酶稀释液将酶稀释至  0.05-0.2U/mL。

按如下配制反应混合物:试剂  I:10 ml; 试剂 II:0.25 mL; 试剂 III:1.5 mL; 试剂 IV:5 mL; 试剂 V:1.5 mL; 双蒸水补充到 50 ml

操作步骤

1. 向1 mL 比色皿中加入反应 1 mL 反应混合液。

2. 将反应混合物在 37°C 预热  5 min。

3. 加入 20μL 待测酶液,混匀。

4. 在 555 nm 处测定 37°C 反应,记录1 min内的吸光度变化(ΔAs)。

*用酶稀释液替代酶液,其它步骤相同,所得溶液吸光度为空白吸光度(ΔAb)ΔA=ΔAs-ΔAb

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