RT-PCR检测方法的具体步骤如下：一、RNA提取：1、根据标本数量分装RLT液：从Kit中取出RLT液，用1.5mL离心管分装，每管500μL（在体系配制区操作）；

2、在生物安全柜内将采样液（鼻拭子、咽拭子、胸水等）或病毒培养物（鸡胚尿囊液或细胞培养液）取100μL加入RLT液管中，充分混匀。3、每管分别加入5μLβ-巯基乙醇，混匀后依次加入600μL70%的乙醇，充分混匀；

3、从Kit中取出带滤柱的2mL收集管，打开包装将其做好标记。取步骤（3）中的混合液600μL加入滤柱中，12000rpm，离心15s，弃收集管中的离心液。

4、滤柱仍放回收集管上，将步骤（3）剩余的混合液全部吸入滤柱中，12000rpm，离心15s，弃离心液。

5、于滤柱中加入700μLWashBufferRW1液，12000rpm，离心15s。

6、从QIAGENRNeasyMiniKit中取一支干净的2mL收集管，将离心后的滤柱移到新的收集管上，于滤柱中加入500μLWashBufferRPE液，12000rpm，离心15s。

7、弃收集管中的离心液，再于滤柱中加入500μLWashBufferRPE液，13000~14000rpm，离心2min。

8、将滤柱移到一个干净的1.5mLeppendorf管上，向滤柱中加入30~50μL的Rnase-freeWater，室温静置1~3min。

9、12000rpm，离心1min，收集离心液即为提取的病毒RNA，立即做实验或-20℃以下保存。