试剂准备

试剂 I：0.1 M肌酸溶液，（含50 mM 磷酸钠缓冲液，pH 7.5），现用现配。

试剂 II：对二甲基氨基苯甲醛（DAB）溶液，2.0 g DAB溶于100 mL DMSO溶液中，再加入15 mL浓HCl。

试剂 III：酶液，使用50 mM磷酸钾缓冲液pH 7.5稀释到约2-3 U/ml，现用现稀释，冰上存放。

操作步骤

1. 取1 mL试剂 I于5 mL EP管中，37℃预热5 min。

2. 加入试剂 III 0. 1 mL，混匀。

3. 37℃水浴反应10 min后，加入2.0 mL试剂 II终止反应，并在25℃放置20 min。

4. 使用紫外分光光度计，测定反应液在435 nm处吸光度值ODtest。

5. 向反应液中加入0.1 mL 10 mM磷酸钾缓冲液（代替试剂Ⅲ），相同条件下测定吸光度值，设定为空白对照ODblank。