肌酐酶

Creatinine amidohydrolase

Creatinine+H2O⇋Creatine

酶学性质

主要用途：用于临床研究中肌酐酶法检测

最适pH

37℃,buffer solution:

pH 6.0-7.5,Na-phosphate;

pH7.5-9.0,Tris-HCl;pH 9.0-10,Glycine-NaOH.

Enzyme concentration:1 mg/mL.

最适温度

10 min-reatcion in K-phosphate buffer pH 8.0.

Enzyme concentration:1 mg/mL.

pH稳定性

25℃,120 min-treatment with 100 mM buffer solution:

pH 5.0-6.0,Acetate;pH 6.0-7.5,Na-phosphate;

pH7.5-9.0,Tris-HCl;pH 9.0-10,Glycine-NaOH.

Enzyme concentration:1 mg/mL.

热稳定性

60 min-treatment with 100 mM

Tris-HCl buffer,pH 8.0.

Enzyme concentration:1 mg/mL.

稳定性（-20℃保存）

活性测定方法

原理：肌酐在肌酐酶催化下生成肌酸，通过检测反应液525 nm处吸光度值变化，测定产物生成量。

酶活定义：单位酶活定义为在下述条件下每分钟催化生成1微摩尔肌酸所需的酶量。

试剂准备

试剂I：磷酸钾buffer，0.3 M，pH 8.0。

试剂II：肌酐溶液，0.1 M。

试剂III：碳酸钠溶液，浓度为4%。

试剂IV：α-萘酚溶液，浓度为2%，溶于无水乙醇中。

试剂V：碱性溶液，含1.2%氢氧化钠和3.2%碳酸钠。

试剂VI：二乙酰溶液，浓度为0.05%。

操作步骤

1.取0.1 mL试剂I与0.8 mL试剂II在5 mL EP管中混匀，37℃孵育5 min。

2.加入0.1 mL酶液，37℃孵育10 min。

3.加入2.0 mL试剂III，混匀，并将反应EP管置于冰水中。

4.吸取步骤3中的混合液0.1 ml，依次添加0.9 mL双蒸水，0.5 mL试剂IV，0.5 mL试剂V和0.5 mL试剂VI。

5.25℃放置1小时，并添加2.5 mL双蒸水稀释。

6.读取525 nm处吸光度值。

向反应液中加入0.1 mL 10 mM磷酸钾缓冲液（代替酶液），相同条件下测定吸光度值，设定为空白对照。