肌氨酸氧化酶的纯化?
来源:yl23455永利官网生物市场中心 时间:2022-10-13 作者:yl23455永利 浏览量:51
1.取400ml培养液3000rpm离心分离10分钟后收集菌体,肌氨酸氧化酶菌体重悬于10ml蛋白提取缓冲液中(50mMNa‑PO4,pH8.0,500mMNaCl,10mMImidazle),15MPa高压破菌,12,000rpm,4℃离心10min,上清液与Ni‑NTA冰上孵育1小时;2.过Ni‑NTA亲和层析柱,用蛋白提取buffer洗涤,最后用250mMImidazle洗脱,收集洗脱液。3.蛋白洗脱液过G50柱去除Imidazle,这样可以得到95%以上纯度的SAO。4.肌氨酸氧化酶活性测定:制备肌氨酸氧化酶的纯品用奥林巴斯AU5400生化仪测定活性,酶活可达30000U/L,且‑20℃甘油冻存6个月,酶活基本保持不变。
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