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产品描述
牛痘病毒加帽酶,来源于携带牛痘病毒 MR 的重组大肠杆菌菌株,由 D1R 和 D12L 两个亚基组成,兼具三种酶活性(RNA 三磷酸酶活性、鸟苷酸转移酶活性和鸟嘌呤甲基转移酶活性)。牛痘病毒加帽酶是催化形成帽子结构的有效酶,能特异性地将7-甲基鸟苷酸帽子结构 (m7Gppp,Cap 0) 加至 RNA 的5′ 端。帽子结构 (Cap 0) 对真核生物 mRNA 的稳定、转运和翻译有着重要的作用。通过酶促反应给RNA 加帽是一种有效简单的方法,能显著改善用于体外转录、转染和显微注射的 RNA 的稳定性和翻译能力。
运输与保存方法: -25~-15℃ 储存(避免反复冻融),≤0℃ 运输储存缓冲液 20 mM Tris-HCl(pH 8.0), 100 mM NaCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 0.1%TritonX-100, 50%glycerol.
活性定义: 在 37℃ 条件下,1 h 内将 10 pmol GTP 完全掺入到 80 nt 转录产物所需的酶量定义为 1 个活性单位 (U)。
质量控制
核酸外切酶活性:10 U 的本品和 1μg λ -Hind III digest DNA 在 37℃ 下反应 16 小时,DNA 的电泳谱带不发生变化;
核酸内切酶活性:10 U 的本品和 1μg λ DNA 在 37℃ 下反应 16 小时,DNA 的电泳谱带不发生变化;
切口酶活性:10 U 的本品和 1μg pBR322 在 37℃ 下反应 16 小时,DNA 的电泳谱带不发生变化;
RNase 活性:10 U的本品和 1.6μg MS2 RNA 在 37℃ 下反应 4 小时,RNA 的电泳谱带不发生变化;
大肠杆菌DNA残留检测:10 U 本品中残留的核酸经 E.coli 16s rDNA 特异性的 Taq Man qPCR 检测,E.coli 基因组残留 ≤1拷贝;
细菌内毒素(Endotoxin):LAL-Test,中国药典 2020 版第四部凝胶限度试验法通则(1143),细菌内毒素含量 ≤ 10 EU/mg。
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