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产品概述:
RNase 抑制剂是从大肠杆菌中表达纯化的重组鼠源 RNase 抑制剂,它通过非共价键方式 1:1 与 RNase A 、B 或 C 结合,从而抑制三种酶的活性,保护 RNA 不被降解。但对核糖核酸酶 1、核糖核酸酶 T1、S1 核酸酶、 核糖核酸酶 H 和曲霉来源核糖核酸酶无效。
RNase 抑制剂经过 RT-PCR、RT-qPCR、IVT-mRNA 检验,能与各类商业化逆转录酶、各种 DNA 聚合酶和 RNA 聚合酶兼容。
与人源 RNase 抑制剂相比,鼠源 RNase 抑制剂不含两个对氧化非常敏感的半胱氨酸,因而具有更高的抗氧化性,使其在低浓度DTT(小于1 mM)下稳定。该特征使其适合用于不能添加高浓度 DTT 的反应(例如 Real-time RT-PCR);产品储存:-20℃ 储存,有效期2年(避免反复冻融);储存缓冲液:50 mM KCl,20 mM HEPES-KOH(pH 7.6 at25°C), 8 mM DTT and 50%glycerol;活性定义:抑制 5 ng RNase A活性的50%所需要的酶量定义为1个活性单位(U)。蛋白分子量:RNase 抑制剂的分子量为50 kDa。
质量控制:核酸外切酶活性:40 U 的本品和1μgλ-HindIII digest DNA 在 37℃ 下反应16小时,DNA的电泳谱带不发生变化;
核酸内切酶活性:40 U 的本品和 1μg λ DNA 在 37℃ 下反应 16 小时,DNA 的 电泳谱带不发生变化;
切口酶活性:40 U 的本品和 1μg pBR322 在 37℃ 下反应 16 小时,DNA 的电泳谱带不发生变化;
RNase活性:40 U 的本品和 1.6μg MS2 RNA 在 37℃ 下反应 4 小时,电泳谱带不发生变化;大肠杆
菌DNA残留检测:40 U 本品中残留的核酸经 E.coli 16s rDNA 特异性的 Taq Man qPCR 检测,E.coli 基因组残留 ≤1 拷贝。
产品应用: 本产品可广泛应用于任何可能存在 RNase 干扰的实验中,以避免 RNA 降解,如:
1. cDNA第一链合成,RT-PCR, RT-qPCR 等;
2. 在体外转录/翻译(如病毒体外复制体系)中保护 RNA,防止降解;
3. 在 RNA 分离纯化过程中抑制 RNase 的活性。
注意事项
1. 剧烈振荡或搅拌会导致酶失活;
2. 抑制剂的活性温度为 25~55ºC,温度 ≥65ºC 失活;
3. 不抑制 RNase H、RNase 1及RNase T1活性;
4. 抑制RNase活性的pH范围较广(pH 5-9 均有活性),在 pH 7-8 时表现最大活性。
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