产品概述

胰蛋白酶可特异切割赖氨酸及精氨酸C末端肽键，可降解细胞间结合蛋白。重组胰蛋白酶的氨基酸序列与猪胰腺来源的胰酶一致，经基因工程改造重组发酵表达生产。可替代传统提取胰蛋白酶用于疫苗、干细胞、免疫细胞治疗、药物筛选、抗体等领域细胞消化过程。抑肽酶、大豆胰蛋白酶抑制剂和金属离子螯合剂等可抑制酶活。

本品与天然提取的胰蛋白酶相比具有相同的特性。该产品在 GMP 级车间生产制造。发酵、纯化和最终配方中不使用含任何动物源性辅料。同时生产和质检过程均经过验证，使得产出批次之间的一致性非常高。

运输与保存方法：储存稳定性：重组胰蛋白酶溶液保存在 -25～-15℃，24 个月稳定。

运输稳定性：干冰保温运输，运输过程不融化，活性稳定。

单位定义： 25℃，pH 7.6，反应体系 3.2mL（1 cm光路）,每分钟酶解 BAEE 使 253nm下的吸收值增加 0.003 定义为一个胰蛋白酶酶活单位 (U)。

质量控制

• 活力检测：中国药典 2020 版第二部胰蛋白酶效价测定法。

• 蛋白浓度：中国药典 2020 版第四部蛋白质含量测定法第六法通则（0731）。

• 大肠杆菌菌体蛋白质残留量：大肠埃希菌菌体蛋白质残留量测定法通则（3412）。

• 蛋白纯度：中国药典 2020 版第四部高效液相色谱法通则（0512)。

• 微生物负载：中国药典 2020 版第四部无菌检查法通则（1101）。

• 外源性DNA残留：中国药典 2020 版第四部外源性 DNA 残留量测定法通则（3407）。

• 细菌内毒素（Endotoxin）：LAL-Test，中国药典 2020 版第四部凝胶限度试验法通则（1143）。

产品优势

• 无动物源性：重组生产，无外源性的病毒污染，生产过程不使用任何动物源原料。

• β构型占比高，纯度高。

• 大肠杆菌菌体蛋白质、外源性 DNA、微生物、金属离子和内毒素含量低。

• 质量稳定：批量生产，可保证稳定连续的批次生产；产品批次间无差异，质量稳定。

产品描述

胰蛋白酶是一种丝氨酸蛋白酶，可裂解赖氨酸和精氨酸 C 端侧的肽键，水解细胞间的蛋白质，破坏细胞间的连接，从而使组织或贴壁细胞离散成单个细胞。

yl23455永利的重组胰蛋白酶消化液是一种微生物发酵的高纯度重组酶，不含动物源性，可替代猪或牛胰蛋白酶，用于免疫细胞治疗、疫苗、药物筛选、抗体等领域的细胞消化过程。本产品含有 EDTA，不含酚红。

产品性质

作用温和：因其纯度高，只有单一酶种作用，解离的特异性更强并且毒性更低。这一机理也可降低胰蛋白酶及其他提取试剂中的多种蛋白酶的解离破坏作用。

无动物源性：生产过程中不使用任何动物源原料，无外源病毒污染等潜在不确定因素的风险，符合药品管理规定

稳定性好：低温条件，2～8℃/-20～-5℃ 可避光储存 12 个月

使用方便：本品为无菌制剂，可替代实验方案中的胰蛋白酶，稀释可降低活性

储存条件：2-8℃，避光。避免反复冻融

有效期：自生产之日起 12 个月。

运输条件：2-8℃，避光运输。

使用说明

重组胰蛋白酶消化液（10×）可用于分离具有强粘附性的贴壁细胞系。

1.  使用前于 37℃ 预热消化液及培养液。注：重组胰蛋白酶消化液可在常温下用于多种细胞的消化。

2. 吸出用过的培养基并丢弃。

3. 使用 5mL 不含钙离子和镁离子的 DPBS  缓冲液洗涤细胞，去除残余培养基，吸出培养基并丢弃。

4. 添加适当体积的重组胰蛋白酶消化液，以能覆盖细胞为限。

5. 37℃ 孵育细胞，孵育期间使用显微镜下观察，至细胞明显收缩并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变化，或者轻敲培养瓶发现细胞处于游离状态。

6. 在培养瓶中加入 5–10 mL 的预热完全的培养基。向各个方向倾斜以确保所有细胞均被悬浮，取细胞悬液至 15mL 离心管中。

7. 100×g 离心 5-10 分钟。

8. 弃去上清液，用 2–5 mL 预热的培养基重悬细胞沉淀。

9. 使用自动细胞计数器确定活细胞密度和存活百分比。

10. 根据您的细胞类型，按照常规方案进行后续实验。

注意事项：为了您的安全健康，请穿实验服并佩戴手套操作；本品不能用于人体。请于无菌环境下操作。

产品描述

胰蛋白酶是一种丝氨酸蛋白酶，可裂解赖氨酸和精氨酸C端侧的肽键，水解细胞间的蛋白质，破坏细胞间的连接，从而使组织或贴壁细胞离散成单个细胞。

yl23455永利的重组胰蛋白酶消化液是一种微生物发酵的高纯度重组酶，不含动物源性，可替代猪或牛胰蛋白酶，用于免疫细胞治疗、疫苗、药物筛选、抗体等领域的细胞消化过程。

本产品含有 EDTA，不含酚红。

产品性质

作用温和：因其纯度高，只有单一酶种作用，解离的特异性更强并且毒性更低。这一机理也可降低胰蛋白酶及其他提取试剂中的多种蛋白酶的解离破坏作用。

无动物源性：生产过程中不使用任何动物源原料，无外源病毒污染等潜在不确定因素的风险，符合药品管理规定。

稳定性好：低温条件，2～8℃/-20～-5℃ 可避光储存 12 个月。

使用方便：本品为无菌制剂，可替代实验方案中的胰蛋白酶，稀释可降低活性运输与保存方法

储存条件：2-8℃，避光。避免反复冻融

有效期：自生产之日起12个月。

运输条件：2-8℃，避光运输。

使用说明

重组胰蛋白酶消化液（1×）可直接替代现有方案中的胰蛋白酶。

1. 使用前于 37℃ 预热消化液及培养液。

2. 吸出用过的培养基并丢弃。

3. 使用 5mL 不含钙离子和镁离子的 DPBS 缓冲液洗涤细胞，去除残余培养基，吸出残余培养基并丢弃。

4. 添加适当体积的重组胰蛋白酶消化液，以能覆盖细胞为限。

5. 37℃ 孵育细胞，孵育期间使用显微镜下观察，至细胞明显收缩并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变化，或者轻敲培养瓶发现细胞处于游离状态。

6. 在培养瓶中加入 5–10 mL 的预热完全的培养基。向各个方向倾斜以确保所有细胞均被悬浮，取细胞悬液至 15mL 离心管中。

7. 100×g 离心 5-10 分钟。

8. 弃去上清液，用 2–5 mL 预热的培养基重悬细胞沉淀。

9. 使用自动细胞计数器确定活细胞密度和存活百分比。

10. 根据您的细胞类型，按照常规方案进行后续实验。

预期用途: 本试剂盒用于定量检测样本中胰蛋白酶的含量。

检测原理:本试剂盒采用双抗体夹心法原理，并偶联生物素-链霉亲和素系统。酶标板微孔中包被抗胰蛋白酶抗体，加入样本后孵育洗涤，再加入生物素化检测抗体孵育，形成抗体-抗原-抗体复合物，再次洗涤后加入辣根过氧化物酶（HRP）标记链霉亲和素（streptavidin，SA）。经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色，TMB 在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，经酸的终止作用转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中胰蛋白酶含量呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD值），根据标准曲线计算样品中胰蛋白酶浓度。

试剂盒组成

1.反应板…………………..………………..8×12孔

2.生物素化检测抗体（200×）……….75μL×1

3.HRP-链霉亲和素（100×）………..120μL×1

4.稀释液…………….………………………45mL×1

5.显色剂……………….………………….…12mL×1

6.终止液……………….……..….……………6mL×1

7.浓缩洗涤液（20×）……….……..…35mL×1

8.标准品（100ng/mL）………………….0.5mL

9.封板膜…….………….…………….……………4张

10.说明书……………….……………………………1份

储存条件及有效期

未拆封的试剂盒可在 2-8℃ 保存一周，-25~-15℃ 保存至失效期。如果一周以后才使用试剂盒，请拆开试剂盒将酶标板、生物素化检测抗体和 HRP-SA 于 -25~-15℃ 保存。剩余试剂  2~8℃ 储存。

所需仪器

1、酶标仪（含 450nm 波长，建议含有双波长检测模式，主副波长分别为 450nm 和 650nm）。

2、微孔板摇床

3、37℃ 恒温箱