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中文：CHO细胞 HCP (宿主蛋白) 残留检测试剂盒
英文：CHO HCP ELISA Kit
纯度：≥90%
货期：24H
货号：HBP003901
规格：96 Tests
中文同义词：CHO细胞 HCP (宿主蛋白) 残留检测试剂盒
英文同义词：CHO HCP ELISA Kit
产品名称:
CHO 细胞 HCP（宿主蛋白）残留检测试剂盒;货号规格: HBP003901 96T/盒;
用途: 本试剂盒用于定量检测样本中 CHOK1 宿主细胞蛋白残留的含量。
检测原理:
本方法采用一步酶联免疫ELISA法。含有CHOK1 HCP 的样品可以与 HRP 标记的山羊抗 CHOK1 抗体以及包被在酶标板上抗CHOK1抗体同时反应，最终形成一种夹心复合物的固相抗体 -HCP- 标记抗体。通过清洗酶标板可以去除未结合的抗原抗体。向孔中加入TMB底物充分反应后，加入终止液后停止显色，用酶标仪读取反应溶液在 450/650nm 处的 OD 或吸光值。OD 值或吸光值与溶液中的 HCP 含量成正比。据此可以根据标准曲线计算出溶液中的HCP浓度。
储存运输条件及有效期
1、2~8℃运输;2、按表一所示，1、2储存于-20℃以下，3-8储存于2-8℃，有效期12个月
产品参数
1、灵敏度：1ng/mL
2、检测范围：3-100ng/mL
3、精密度：批内变异系数 ≤10%，批间变异系数 ≤15%
4、HCP覆盖率：80% 以上
5、特异性：本试剂盒是通用的，因为它可以同 CHOK1 HCP 发生特异反应，而不依赖于纯化过程
试剂准备
1、PBST 0.05%15ml 20×PBST 0.05%，稀释于ddH2O中，定容至300ml。
2、1.0%BSA将瓶中的 1g BSA 溶于 100ml PBST0.05% 中，充分混匀至完全溶解，2-8℃ 储存，制备好的稀释缓冲液有效期为7天，建议按需配制。
3、检测液 2μg/mL 取 48μL 0.5mg/mL Anti-CHOHCP-HRP，稀释于 11952μL 的 1% BSA 中，得到终浓度2μg/mL检测液。
4、QC 和 CHOK1 HCP 标准品的配制
磁珠法痕量检测核酸提取试剂盒
宿主细胞残留 DNA 样本前处理试剂盒适用于生物制品样本中残留 DNA 检测的前处理。本试剂盒采用磁珠法 DNA 提取原理，可最大限度的分离纯化样本中的宿主 DNA，实现从不同复杂基质中回收微量DNA 样本。该前处理试剂盒与宿主细胞残留 DNA（qPCR）检测试剂盒配合使用。
磁珠法提取 DNA 是通过裂解液裂解细胞组织样本，从样本中游离出来的核酸分子被特异的吸附到磁性颗粒表面，将携带核酸的磁珠移动至不同的试剂槽内，经过细胞裂解、核酸吸附、洗涤与洗脱等步骤，最终得到纯净的核酸。
运输及保存方法:室温保存。冷冻会大幅度降低磁珠性能，在储存运输中请避免磁珠冻结。
蛋白酶和助沉剂 2~8℃ 保存。
自备设备和试剂磁性分离架:杭州奥盛 Auto-Pure 32 A 核酸提取仪或其他全自动化提取仪离心机，移液器，水浴锅/金属浴，漩涡振荡器 1.5 mL 无菌低吸附离心管，5 M 的 NaCl 等;
有效期:规定条件下 12 个月,货号规格: HBP003501/16×6 Tests（板式）;HBP003502/96 Tests（瓶式）
宿主细胞残留 DNA（HCD）是指可能出现于生物制品中的来自宿主细胞的 DNA 片段。生物制品中宿主细胞残留 DNA 可能会传递肿瘤或病毒相关基因，具有致癌性和感染性。宿主细胞杂质的去除是生物制药产品生产的关键步骤。宿主 DNA 残留的检测成为药品监管部门对相关生物制药企业监管的重要内容。最终产品中的 DNA 含量应尽可能低，需用高灵敏度的方法测定。
CHO DNA assay Kit 检测原理: Taq Man 荧光探针法基本原理是依据目的基因设计合成一个能够与之特异性杂交的探针，该探针的 5 ‘端标记荧光基团，3′ 端标记淬灭基团。正常情况下两个基团的空间距离很近，荧光基因因淬灭而不能发出荧光。PCR 扩增时，引物与该探针同时结合到模板上，探针的结合位置位于上下游引物之间。当扩增延伸到探针结合的位置时，Taq 酶利用 5’ 外切酶活性，将探针 5 ‘端连接的荧光分子从探针上切割下来，从而使其发出荧光。检测到的荧光分子数与 PCR 产物的数量成正比，因此，根据 PCR 反应体系中的荧光强度即可计算出初始DNA模板的数量。
CHO DNA assay Kit 产品用途
（1）用于定量检测各种生物制品的中间品、半成品和成品中 CHO 宿主细胞 DNA 的残留。
（2）检测快速，专一性强，性能可靠，最低检测限可以达到fg水平。
（3）试剂盒配套的 CHO DNA 定量参考品，已溯源至国家标准品。
CHO DNA assay Kit 产品信息:
适用机型：7500 Real-Time PCR System (ABI); Quant Studio 5 (ABI); SL AN-96 P Real-Time PCR sys tem; qTOWER 3G (德国耶拿).
线性范围：3 fg/μL~300 pg/μL
定量限：1 fg/μL
准确性：回收率 70-130%
运输和储存：≤-18℃避光储存和运输
有效期：规定条件下12个月
规格
| 货号 | 规格 |
|---|---|
| HBP003303 | 100 reactions |
预期用途
本试剂盒利用 TaqMan 荧光探针的 qPCR 检测原理对重组蛋白、抗体、疫苗等生物制品中CHO 细胞残留 DNA 进行定量测定，检测快速，专一性强。仅供研究使用，不可用于临床。本检测方法可溯源至中国药典方法，通则<3407>。
试剂盒组成
| 名称 | 规格 | 支数 | 储存条件 |
|---|---|---|---|
| CHO DNA Positive Control | 30ng/μL 50μL/μL | 1 | -25℃~-15℃ |
| Compound of primers and probes | 0.5mL | 1 | -25℃~-15℃，避光 |
| qPCR Master Mix | 1.5mL | 1 | -25℃~-15℃，避光 |
| DNA Dilution Buffer | 1.5mL | 1 | -25℃~-15℃ |
储存条件及有效期
- 有效期：规定储存条件下 24 个月。
- 运 输 和 储 存 ： 长 时 间 储 存 请 放 置 在 -25~-15℃ ，运输过程中请放置在干冰或冰 袋中。
CHO DNA 阳性对照标准曲线样品的 制备
CHO DNA 阳性对照品浓度标注于管壁标签上，确认实际浓度后再进行稀释。用试剂盒中提供的DNA稀释液将CHO DNA阳性对照品进行梯度稀释，稀释浓度依次为3000pg/μL、300pg/μL、30pg/μL、3pg/μL、0.3pg/μL、0.03pg/μL、0.003pg/μL。
具体操作如下：
- 将试剂盒中的 CHO DNA 阳性对照品和DNA 稀释液从-20℃取出后置于冰上融化，待完全融化后，轻微振荡混匀，快速离心 2~5秒。
- 取 7 支低吸附离心管，分别标记为 ST0、ST1、ST2、ST3、ST4、ST5 和 ST6。按下表准备 CHO DNA 标准样品，每步稀释后各管均用旋涡混合器混匀，快速离心 2~5 秒，再进行下一个梯度稀释，标准样品稀释完后2~8℃保存，现配现用。
CHO DNA 阳性对照品的稀释
| 稀释管 | 稀释步骤 | 浓度（pg/μL |
|---|---|---|
| ST0 | 10μL DNA 阳性对照品 + 90μL DNA 稀释液 | 3000 |
| ST1 | 10μL ST0 + 90μL DNA 稀释液 | 300 |
| ST2 | 10μL ST1 + 90μL DNA 稀释液 | 30 |
| ST3 | 10μL ST2 + 90μL DNA 稀释液 | 3 |
| ST4 | 0μL ST3 + 90μL DNA 稀释液 | 0.3 |
| ST5 | 10μL ST4 + 90μL DNA 稀释液 | 0.03 |
| ST6 | 10μL ST5 + 90μL DNA 稀释液 | 0.003 |
已融化未使用的 DNA 稀释液可暂存于 2-8℃
加样回收质控 ERC 的制备
根据需要设置 ERC 中的 CHO DNA 加标量 （建议加标量设定为其样品历史无加标测试值的 2~30 倍），以制备加 30pg CHO DNA量的供试品 ERC 为例，
具体操作如下：
- 取100μL供试品加入1.5mL低吸附离心管中。
- 加入 10μL ST3，混匀，标记为供试品 ERC。
- 样本 ERC 与同批供试品一起进行前处理，制备成供试品 ERC 纯化液。
阴性质控 NCS 的制备
根据实验设置阴性质控，
具体操作如下：
- 取 100μL 供试品基质溶液（或 DNA 稀释液）加入 1.5mL 低吸附离心管中标记为阴性质控 NCS。阴性质控 NCS 和同批供试品一起进行前处理，制备成阴性质控 NCS 纯化液。
qPCR 反应体系
1.根据所要检测的标准曲线及待测样本数量，计算所需反应孔数。反应孔数=（6 个浓度梯度的标准曲线样品
+1 个空白对照 BLK+1 个阴性质控 NCS+供试品+供试品 ERC）×3；
2.根据反应孔数计算本次所需的反应混合液的总量：反应混合液总量=（反应孔数+2）×（15μL qPCR Master Mix + 5μL Compound of primers and probes）（含有 2 孔的加样误差损失量）
3.各试剂置于室温融化后，根据上一步所计算的引物与 Mix 的量配置所需要的反应混合液，轻微振荡混匀，然后按下表所示加样
