蛋白酶k是一种枯草蛋白酶类的高活性蛋白酶，从林伯氏白色念球菌中纯化得到。该酶有两个Ca2+结合位点，它们离酶的活性中心有一定距离，与催化机理并无直接关系。然而，如果从该酶中除去Ca2+，由于出现远程的结构变化，催化活性将丧失80%左右，但其剩余活性通常已足以降解在一般情况下污染酶制品的蛋白质。所以，蛋白酶k消化过程中通常加入edta（以抑制依赖于mg2+的核酸酶的作用）。但是，如果要消化对蛋白酶k具有较强耐性的蛋白，如角蛋白一类，则可能需要使用含有1mmol/lCa2+而不含edta的缓冲液。在消化完毕后、纯化核酸前要加入egt（ph8.0）至终浓度为2mmol/l，以鳌合Ca2+。