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产品概述
RNase 抑制剂 是从大肠杆菌中表达纯化的重组鼠源RNase抑制剂,它通过非共价键方式1:1与RNase A、B或C结合,从而抑制三种酶的活性,保护 RNA 不被降解。但对核糖核酸酶1、核糖核酸酶T1、S1核酸酶、核糖核酸酶H和曲霉来源核糖核酸酶无效。
RNase 抑制 剂经过 RT-PCR、RT-qPCR、IVT-mRNA 检验,能与各类商业化逆转录酶、各种 DNA 聚合酶和 RNA 聚合酶兼容。
与人源 RNase 抑制剂相比,鼠源RNase抑制剂不含两个对氧化非常敏感的半胱氨酸,因而具有更高的抗氧化性,使其在低浓度 DTT(小于1 mM)下稳定。该特征使其适合用于不能添加高浓度 DTT 的反应(例如 Real-timeRT-PCR)。
产品储存-25~-15℃储存,有效期2年(避免反复冻融)。
储存缓冲液:50 mM KCl,20 mM HEPES-KOH (pH 7.6 25°C),8 mM DTT and 50% glycerol.
活性定义: 抑制 5 ng RNase A 活性的 50% 所需要的酶量定义为1个活性单位(U)。
蛋白分子量: RNase 抑制剂的分子量为 50 kDa。
质量控制: 核酸外切酶活性:40 U 的本品和 1 μgλ – HindIII digest DNA 在 37℃ 下反应 16 小时, DNA 的电泳谱带不发生变化;
核酸内切酶活性:40 U 的本品和 1μg λ DNA 在 37℃ 下反应 16 小时,DNA 的电泳谱带不发生变化;切口酶活性:40 U的本品和1μg pBR322在37℃下反应16 小时,DNA 的电泳谱带不发生变化;
RNase 活性:40 U 的本品和 1.6μg MS2 RNA 在 37℃ 下反应 4 小时,电泳谱带不发生变化;
大肠杆菌DNA残留检测:40 U 本品中残留的核酸经 E.coli 16s rDNA 特异性的 Taq Man qPCR 检测, E.coli 基因组残留 ≤0.1 pg/40 U。细菌内毒素(Endotoxin):LAL-Test,中国药典 2020 版第四部凝胶限度试验法通则(1143),细菌内毒素含量 ≤10 EU/mg。
产品应用
本产品可广泛应用于任何可能存在 RNase 干扰的实验中,以避免RNA降解,如:
1. cDNA第一链合成,RT-PCR, RT- qPCR 等;
2. 在体外转录/翻译(如病毒体外复制体系)中保护 RNA,防止降解;
3. 在RNA分离纯化过程中抑制RNase的活性。
注意事项
1. 剧烈振荡或搅拌会导致酶失活;
2. 抑制剂的活性温度为 25~55ºC,温度 ≥65ºC 失活;
3. 不抑制 RNase H、RNase 1 及 RNase T1 活性;
4. 抑制 RNase 活性的 pH 范围较广(pH 5-9 均有活性),在 pH 7-8 时表现最大活性。
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