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产品概述
无机焦磷酸酶(酵母),来源于携带有酿酒酵母无机焦磷酸酶基因的重组大肠杆菌菌株,该酶可催化无机焦磷酸盐水解生成正磷酸盐:P207–4+H20→2HP04–2 在核酸扩增、体外转录等反应中,无机焦磷酸酶可水解随着这些反应生成的无机焦磷酸盐,从而解除生成的无机焦磷酸盐对反应体系的抑制。焦磷酸盐的去除可使反应平衡向产物生成端平移,有利于提高合成产物的产量。例如 RNA 和 DNA 的合成反应,在无机焦磷酸酶的作用下,反应平衡向合成产物方向移动。
产品储存: -25~-15℃ 储存,有效期2年(避免反复冻融)。
储存缓冲液: 20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 100 mM KCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM dithiothreitol, 50%glycerol。
活性定义
在标准反应条件下,每分钟催化水解无机焦磷酸盐生成 1μmol 磷酸盐所需要的酶量为1个活性单位(U)。
标准反应条件为:500μL 反应体系中包含 100 mM Tris-HCl (pH 7.2,25℃)、2 mMMgCl2 和 2 mM 无机焦磷酸盐,于 25℃ 反应 10 min。
蛋白分子量:无机焦磷酸酶(酵母)的分子量为 71 kDa。
质量控制:核酸外切酶活性:0.1 U 的本品和 1μg λ -Hind III digest DNA 在 37℃ 下反应 16 小时,DNA 的电泳谱带不发生变化;
核酸内切酶活性:0.1 U 的本品和 1μg λ DNA 在 37℃ 下反应 16 小时,DNA 的电泳谱带不发生变化;
切口酶活性:0.1 U的本品和1μg pBR322在37℃ 下反应 16 小时,DNA 的电泳谱带不发生变化;
RNase 活性:0.1 U的本品和1.6μg MS2RNA在37℃下反应4小时,RNA 的电泳谱带不发生变化;
大肠杆菌DNA残留检测:0.1 U本品中残留的核酸经E.coli 16s rDNA 特异性的 Taq Man qPCR 检测, E.coli 基因组残留≤1拷贝;
细菌内毒素(Endotoxin):LAL-Test,中国药典 2020 版第四部凝胶限度试验法通则(1143),细菌内毒素含量 ≤10 EU/mg。
产品应用
1.转录反应中提高RNA的产量。
注意事项
1. 本品在多种反应Buffer中均具有活性,通常本品在 HDA 扩增和 LAMP 扩增等实验中可直接接入。
2. 本品的用量在不同的实验中需要优化,通常在 0.05-1 U/mL 浓度之间调整,其中体外转录体系建议使用 4 U/mL。
3. 本品在 16~37°C 均具有活性,但最适反应温度为 25°C。
4. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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